Aufgrund der Tendenz, eine hohe Anzahl von falsch positiven Ergebnissen zu erzeugen, die durch Bandkontamination mit heterogenen Sequenzen verursacht werden, müssen differentielle Anzeigetreffer durch eine alternative Aktion zur Bestimmung der differentiellen Expressionsform bestätigt werden. Andererseits werden häufig northern blot oder q-PCR verwendet, um die Ergebnisse zu bestätigen. Beide Techniken weisen Nachteile auf. Northern blot ist durch seine Fähigkeit begrenzt, immer nur mit jeweils einer mRNA zu untersuchen. Andererseits erfordert die q-PCR, dass die Transkripte lang genug sind, um Primer für die Verkettung zu erzeugen, und Sonden können kostspielig sein. Zusammenfassend wurde Reverse Northern als ein Mittel zur Bestätigung von Treffern aus DD-PCR oder Sequenzen mit veränderter Form von Expressionsniveaus verwendet. In diesem Fall wird die Membran mit amplifizierten DD-PCR-Produkten beschichtet, die in Vektoren kloniert, sequenziert und erneut amplifiziert wurden.
Bild 250A | Allgemeines umgekehrtes northern blot Verfahren unter Verwendung von cDNA aus einer Testerprobe und einer SSH-Bibliothek. Die Überexpression von Transkripten in der Testerprobe erscheint als dunklere Punkte auf der Membran Cddouglas2 / Attribution-Share Alike 4.0 International | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Revnorthern1.jpg) from Wikimedia Commons
Autor : Milos Pawlowski
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