Faktoren, die eine enzymvermittelte chemische Reaktion beeinflussen, würden eine Ligationsreaktion, beispielsweise die Konzentration des Enzyms und der Reaktanten, zusätzlich zu der Reaktionstemperatur und der Inkubationszeit absolut beeinflussen. Die Ligation wird durch die Tatsache erschwert, dass die gewünschten Ligationsprodukte für die meisten Ligationsreaktionen zwischen zwei unterschiedlichen DNA -Molekülen liegen sollten und die Reaktion sowohl inter- als auch intramolekulare Reaktionen umfasst und dass ein zusätzlicher Annealing-Schritt für eine effiziente Ligation erforderlich ist.
Die drei Schritte zur Bildung einer neuen Phosphodiesterbindung während der Ligation sind: Enzymadenylylierung, Adenylyltransfer zu DNA und Nickversiegelung. Mg (2+) ist ein Cofaktor für die Katalyse, schlüssig ist bei hoher Konzentration von Mg (2+) die Ligationswirksamkeit hoch. Wenn die Konzentration von Mg (2+) begrenzt ist, ist die Nickversiegelung die geschwindigkeitsbestimmende Reaktion der Wirkung, und adenylyliertes DNA -Zwischenprodukt bleibt in der Lösung. Eine solche Adenylylierung des Enzyms hemmt die Rückbindung an den adenylylierten DNA -Zwischenvergleich einer Achillesferse von LIG1 und stellt ein Risiko dar, wenn sie nicht fixiert sind.
Bild 092A | 9. Herstellung von Kodecyten / Kodevirionen. Mischen Sie einfach Zellen / Virionen mit einer FSL-Lösung (die 1 oder mehr FSLs enthält) und inkubieren Sie 10–120 Minuten bei 37 ° C (oder bei Temperaturen von nur 4 ° C). Die Konstrukte werden spontan in die Membran eingebaut und es sind keine weiteren Schritte erforderlich. | Xiphiaz / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons
Autor : John Kaisermann
Kommentare
Kommentar veröffentlichen