Bei der Herstellung von Templates für NGS -Reaktionen werden zwei Methoden verwendet : amplifizierte Templates, die von einzelnen DNA -Molekülen stammen, und einzelne DNA -Molekül-Templates. Für Bildgebungssysteme, die nicht auf einzelne Fluoreszenzereignisse treffen können, ist die Amplifikation von DNA -Templates erforderlich. Die drei häufigsten Amplifikationsmethoden sind Emulsion PCR (emPCR), Rolling Circle und Festphasenamplifikation. Die endgültige Verteilung der Vorlagen kann räumlich zufällig oder in einem Raster erfolgen.
Emulsions-PCR
Bei Emulsionsverfahren PCR wird zunächst eine DNA -Bibliothek durch zufällige Fragmentierung des Genoms DNA erzeugt. Einzelsträngige DNA -Fragmente (Matrizen) werden mit Adaptern oder Linkern an die Oberfläche von Kügelchen gebunden, und ein Kügelchen wird an ein einzelnes DNA -Fragment aus der DNA -Bibliothek gebunden. Die Oberfläche der Perlen enthält Oligonukleotidsonden mit Sequenzen, die zu den Adaptern komplementär sind, die die DNA -Fragmente binden. Die Perlen werden dann in Wasser-Öl-Emulsionströpfchen unterteilt. In der wässrigen Wasser-Öl-Emulsion ist jedes der Tröpfchen, die eine Perle einfangen, eine PCR Mikroreaktor, der verstärkte Kopien der einzelnen DNA -Template erzeugt.
Bild 155A | Die PacBio SMRT-Technologie und Oxford Nanopore können unverändert DNA verwenden, um auf Methylierung zu stoßen. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) von Wikimedia Commons
Autor : Yavor Mendel
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