Eine der grundlegendsten Techniken der Molekularbiologie zur Untersuchung des Proteinservices ist das molekulare Klonen. Bei dieser Technik wird DNA, das für ein interessierendes Protein kodiert, unter Verwendung der Polymerasekettenreaktion( PCR) und / oder der Begrenzungsenzyme in ein Plasmid (Expressionsvektor) kloniert. Ein Vektor weist drei charakteristische Merkmale auf: einen Replikationsursprung, eine Mehrfachklonierungsstelle( MCS) und einen selektiven Marker, üblicherweise Antibiotikaresistenz. Stromaufwärts der Mehrfachklonierungsstelle befinden sich die Promotorregionen und die Kopierstartstelle, die die Expressionsform des klonierten Gens regulieren. Dieses Plasmid kann entweder in Bakterien- oder Tierzellen inseriert werden. Das Einbringen von DNA in Bakterienzellen kann durch Transformation durch Aufnahme von Nackt erfolgen DNA, conjugation über Zell-Zell-Kontakt oder durch Transduktion über einen viralen Vektor. Die Einführung von DNA in eukaryotische Zellen, wie von tierischen Zellen gezeigt, auf physikalische oder chemische Weise wird als transfection bezeichnet. Es stehen verschiedene ungleiche transfection Techniken zur Verfügung, wie Calciumphosphat transfection, Elektroporation, Mikroinjektion und Liposom transfection zeigen. Das Plasmid kann in das Genom integriert sein, was zu einem stabilen transfection führt, oder es kann unabhängig vom Genom bleiben, das als transient bezeichnet wird transfection .
Bild 095A | Schematische Beziehung zwischen Biochemie, Genetik und Molekularbiologie Kein maschinenlesbarer Autor angegeben. OldakQuill angenommen (basierend auf urheberrechtlichen Ansprüchen). (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Schematic_relationship_between_biochemistry,_genetics_and_molecular_biology.svg), "Schematische Beziehung zwischen Biochemie, Genetik und Molekularbiologie", https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/ Legalcode von Wikimedia Commons
Autor : Milos Pawlowski
Kommentare
Kommentar veröffentlichen