Vorwärts- und Rückwärtsprimer werden mit hoher Dichte kovalent an den Objektträger in einer Durchflusszelle gebunden. Das Verhältnis der Primer zur Matrize auf dem Träger definiert die Oberflächendichte der amplifizierten Cluster. Die Durchflusszelle wird Reagenzien zur Verlängerung auf Polymerasebasis ausgesetzt, und das Priming erfolgt, wenn das freie / distale Ende eines ligierten Fragments ein "Brücken" zu einem komplementären Oligo auf der Oberfläche bildet. Wiederholte Denaturierung und Verlängerung führen zu einer lokalisierten Amplifikation von DNA Fragmente an Millionen von verschiedenen Stellen auf der Oberfläche der Durchflusszelle. Die Festphasenamplifikation erzeugt 100–200 Millionen räumlich getrennte Matrizencluster und stellt freie Enden bereit, an die dann ein universeller Sequenzierungsprimer hybridisiert wird, um die Sequenzierungsreaktion zu initiieren. Diese Technologie wurde 1997 vom Genfer Biomedizinischen Forschungsinstitut (GBRI) von Glaxo-Welcome von Pascal Mayer, Eric Kawashima und Laurent Farinelli zum Patent angemeldet und 1998 erstmals öffentlich vorgestellt. 1994 reichten Adams und Kron eine Patent für eine ähnliche, aber nicht klonale Oberflächenamplifikationsoperation mit dem Namen "Brückenamplifikation", die 1997 von Church und Mitra für die klonale Amplifikation angepasst wurde.
Bild 155A | Die PacBio SMRT-Technologie und Oxford Nanopore können unverändert DNA verwenden, um auf Methylierung zu stoßen. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) von Wikimedia Commons
Autor : Yavor Mendel
Kommentare
Kommentar veröffentlichen